96 corredi del test ELISA della prova per riproducibilità di rilevazione della kanamicina alta

Kanamicina ELISA Test Kit

Descrizione di prodotto

La kanamicina ELISA Test Kit del ^™ di REAGEN è un immunotest enzimatico competitivo per l'analisi quantitativa di kanamicina in carne/fegato/rene, lysate delle cellule, urina, siero e latte.

Le caratteristiche uniche del corredo sono:

• Alti recupero (>80%), rapidi (10-40 minuti) e metodi redditizi dell'estrazione.

• Il limite di segnalazione è 0,2 ng/g.

• Alta riproducibilità.

• Un'analisi rapida di ELISA (meno di 1 ora indipendentemente dal numero dei campioni).

Panoramica di procedura

Il metodo è basato su un'analisi colorimetrica competitiva di ELISA. La kanamicina-BSA è stata ricoperta nei pozzi della piastrina. Durante l'analisi, il campione e l'anticorpo della kanamicina (anticorpo #1) e HRP-coniugato (l'anticorpo HRP-coniugato #2) si aggiunge ai pozzi per incubazione. Se il residuo della kanamicina è presente nel campione, competerà alla kanamicina sui pozzi della piastrina per l'anticorpo della kanamicina, l'anticorpo secondario, etichettato con un enzima della perossidasi, obiettivi l'anticorpo primario che è complessato alla droga ricoperta sui pozzi della piastrina. L'intensità del colore risultante, dopo l'aggiunta del substrato di HRP (TMB), ha una relazione inversa con la concentrazione del residuo della kanamicina nel campione.

Kit Contents, stoccaggio e durata di prodotto in magazzino

La kanamicina ELISA Test Kit del ^™ di REAGEN ha la capacità per le 96 determinazioni o le prove di 42 campioni due volte (ammettendo 12 pozzi per le norme). Restituisca tutti i microwells inutilizzati alla borsa della stagnola e risigillili con il diseccante fornito nel pacchetto originale. Immagazzini il corredo a 2-8°C *. La durata di prodotto in magazzino è di 12 mesi in cui il corredo è immagazzinato correttamente.

Se non state progettando di usare il corredo per oltre 1 mese, l'azione ordinaria della kanamicina del deposito, l'anticorpo #1and della kanamicina HRP-ha coniugato l'anticorpo #2 a -20°C o in un congelatore.

Sensibilità (limite di segnalazione)

Specificità (reattività crociata)

Materiali richiesti non forniti del corredo

• Lettore del piatto di microtitolo (450 nanometro)

• Miscelatore del tessuto (per esempio omogeneizzatore matrice del tessuto di Omni)

• Miscelatore di vortice (per esempio miscelatore di Genie Vortex da VWR)

• pipette 10, 20, 100 e 1000 dell'UL

• Pipetta multicanale: 50-300 UL (facoltativa)

Avvertimenti e precauzioni

• Le norme contengono la kanamicina. Maniglia con cura particolare.
• Non usi il corredo dopo la data di scadenza.
• Non mescoli i reagenti dai corredi differenti o i lotti eccezione fatta per le componenti con lo stesso numero del pezzo nelle loro date di scadenza. GLI ANTICORPI E LE PIASTRINE SONO KIT-AND LOT-SPECIFIC.
• Provi a mantenere una temperatura del laboratorio di 20°-25°C (68°-77°F). Eviti eseguire le analisi nell'ambito di o vicino agli sfiatatoi, come questo può causare l'eccessivi raffreddamento, riscaldamento e/o evaporazione. Inoltre, non esegua le analisi alla luce solare diretta, come questo può causare l'eccessivo calore e l'evaporazione. Le cime fredde del banco dovrebbero essere evitate disponendo parecchi strati dell'asciugamano di carta o un certo altro materiale di isolamento sotto i piatti di analisi durante l'incubazione.
• Assicuri che usando stiate distillando soltanto o l'acqua deionizzata poiché la qualità dell'acqua è molto importante.
• Nel pipettare i campioni o i reagenti in una piastrina di microtitolo vuota, disponga le punte della pipetta nell'angolo più basso del pozzo, stabilente il contatto con la plastica.
• Le incubazioni dei piatti di analisi dovrebbero essere cronometrate precisamente come possibile. Sia coerente quando aggiungono le norme al piatto di analisi. In primo luogo e poi aggiunga le vostre norme i vostri campioni.
• Aggiunga le norme per placcare soltanto nell'ordine da concentrazione bassa ad alta concentrazione poichè questo minimizzerà il rischio di compromesso della curva standard.
• Refrigeri sempre i piatti in borse sigillate con un diseccante per mantenere la stabilità. Impedisca la condensazione la formazione sui piatti permettendoli di equilibrare alla temperatura ambiente (20 – 25°C/68 – 77°F) mentre nell'imballaggio.

Sia sicuro che i campioni sono immagazzinati correttamente. In generale, i campioni dovrebbero essere refrigerati a 2-4°C per i non non più di 1-2 giorni. Campioni della gelata ad un minimo di -20°C se devono essere immagazzinati per un periodo più lungo. I campioni congelati possono essere sciolti ai temps della stanza (20 – 25°C/68 – 77°F) o in un frigorifero prima dell'uso.

• Preparazione di diluente 1×Sample: Miscela 1 volume di diluente 10×Sample con 9 volumi di acqua distillata.
• Preparazione dell'amplificatore esterno 1×Sample: Miscela 1 volume di amplificatore esterno 10×Sample con 9 volumi di acqua distillata.

Cellula Lysate

• Prenda l'UL 100 del lysate delle cellule, aggiunga l'UL 900 dell'amplificatore del diluente 1×Sample, mescoli bene.

• Centrifuga per 5 minuti a 4000 x G.

• Prenda l'UL 50 del surnatante per pozzo per l'analisi.

Nota: Fattore di diluizione: 10.

Carne pesci/del gamberetto/fegato/rene

• A 1,0 g del campione omogeneizzato, aggiunga 4.0mL dell'amplificatore esterno 1×Sample,

• Vortice il campione per i minuti 1 con il miscelatore di vortice.

• Centrifughi il campione per 5 minuti a 4.000 la x G.

• Trasferisca con attenzione 200uL dello strato superiore ad un nuovo tubo, aggiunga 1.375mldidiluentedelcampione1Xe25uLdell'amplificatoredell'equilibriodelcampione, vorticeper30secondi.

• Usi 50uL per pozzo per l'analisi.

Nota: Fattore di diluizione: 40.

Urina/siero

• Prenda 50uL di urina o il campione del siero, aggiunge 1,2 ml di diluente del campione 1X, si mescola bene.

• Centrifuga per 5 minuti a 4.000 x G.

• Prenda 50uL del surnatante per pozzo per l'analisi.

Nota: Fattore di diluizione: 25.

Latte

• Aggiunga 100uL del campione del latte in un tubo centrifugo, aggiunga 900uL del diluente del campione 1X.
• Vortice vigoroso per 30 secondi.
• Centrifuga a 4.000 x g per 10 minuti.
• Usi 50uL del campione galleggiante per l'analisi.

Nota: Fattore di diluizione: 10

PROTOCOLLO DEL CORREDO DEL TEST ELISA DELLA KANAMICINA

Preparato del reagente

IMPORTANTE: Tutti i reagenti dovrebbero essere portati fino alla temperatura ambiente prima dell'uso (a 1 – 2 ore 20 – 25°C/68 –°F) 77; Assicuri che «sezione colta di precauzioni e di avvertimenti» alle soluzioni della pagina 3. dovreste essere preparato appena prima del test ELISA. Tutti i reagenti dovrebbero essere mescolati delicatamente invertendo o turbinando prima dell'uso. Prepari i volumi che sono necessari per il numero dei pozzi che sono funzionati. Non restituisca i reagenti ai tubi/bottiglie di riserva originali. Facendo uso dei bacini idrici eliminabili quando trattare i reagenti può minimizzare il rischio di contaminazione ed è raccomandato.

• Preparazione della soluzione del lavaggio 1X

Miscela 1 volume della soluzione del lavaggio 20X con 19 volumi di acqua distillata.

ELISA Testing Protocol

Identifichi le diverse strisce che saranno usati ed i reagenti di aliquota come il seguente esempio:

• Aggiunga l'UL 50 delle norme di ogni kanamicina due volte nei pozzi differenti (aggiunga le norme per placcare soltanto nell'ordine da concentrazione bassa ad alta concentrazione).

• Aggiunga l'UL 50 di ogni campione due volte nei pozzi differenti del campione.

• Aggiunga UL 50 l'UL HRP-Coniugare Ab#2 ad ogni pozzo e 50 dell'anticorpo #1 della kanamicina ad ogni pozzo. Mescoli bene delicatamente oscillando il piatto manualmente per 30s.

• Incubi il piatto per 30 minuti alla temperatura ambiente (20 – 25°C/68 – 77°F). (Eviti la luce solare diretta e le cime fredde del banco durante l'incubazione. Copertura del piatto di microtitolo mentre incubare è raccomandata).

• Lavi il piatto 4 volte con l'UL 250 della soluzione del lavaggio 1X. Dopo l'ultimo lavaggio, inverta il piatto e delicatamente spilli l'essiccatoio a piatti sugli asciugamani di carta (esegua il punto seguente subito dopo dei lavaggi del piatto. Non lasci che il piatto si asciughi all'aria fra i punti di funzionamento).

• Aggiunga l'UL 100 del substrato di TMB. Cronometri la reazione subito dopo dell'aggiunta del substrato. Mescoli la soluzione delicatamente oscillando il piatto manualmente per 30s mentre incubano (non metta alcun substrato di nuovo al contenitore originale per evitare alcuna contaminazione potenziale. Tutta la soluzione del substrato che esibisce la colorazione è indicativa di deterioramento e dovrebbe essere scartata. Copertura del piatto di microtitolo mentre incubare è raccomandata).

• Dopo l'incubazione per 15 minuti alla temperatura ambiente (il°F) 20 – 25°C/68 – 77, aggiunge l'UL 100 dell'amplificatore di arresto per fermare la reazione enzimica.

• Legga il piatto appena possibile che segue l'aggiunta dell'amplificatore di arresto su un lettore del piatto con la lunghezza d'onda di 450 nanometro (prima di lettura, usi una strofinata senza filaccia sul fondo del piatto per assicurarsi che nessun'umidità o impronta digitale interferisca con le letture).

Calcoli di concentrazione nella kanamicina

Una curva standard può essere costruita tracciando la capacità di assorbimento relativa media (%) si è verificata da ogni norma di riferimento contro la sua concentrazione in ng/ml su una curva logaritmica.

Capacità di assorbimento relativa (%) = norma zero di capacità di assorbimento o campione x 100

Usi i valori relativi medi di capacità di assorbimento per ogni campione per determinare la concentrazione corrispondente della droga provata in ng/ml dalla curva standard.

La seguente figura è una curva standard del cloramfenicolo tipico.